Билирубин микрометод

Билирубин микрометод

Было проанализировано 30 медицинских карт стационарного больного детей, находившихся на стационарном лечении в ГОДКБ в 2008 году в отделении патологии новорожденных (27), отделении анестезиологии и реанимации (3) с гемолитической болезнью новорожденных. Учитывались следующие показатели: пол, место жительства, срок гестации, акушерско-гинекологический анамнез матери, вид изоиммунизации (АВО или Rh), срок появления желтушности кожных покровов, неврологический статус, клиническая форма и степень тяжести заболевания, лабораторные данные, принципы лечения, длительность пребывания в стационаре.

Лабораторное исследование проводилось на базе клинико-диагностической лаборатории ГОДКБ. Проводилось определение уровня билирубина и гликемии сыворотки крови, анализ показателей периферической крови с подсчетом ретикулоцитов и тромбоцитов, исследование групп крови и резус — принадлежности.

Определение билирубина в сыворотке крови

Преданалитический этап:

— липемия и гемолиз сыворотки искажают результаты исследования. Липемия приводит к ошибочно завышенному результату, а гемолиз — к заниженному;

— материалы нельзя держать на свету. Воздействие прямого солнечного света уже к исходу первого часа может снижать на 50% уровень БР (на этом основана фототерапия новорожденных);

— проба должна анализироваться в течение 2 часов с момента взятия при хранении при комнатной температуре в темноте или 12 часов в холодильнике в темноте;

— выражена интерференция лекарств — на общий БР — левомицетин, тетрациклин, аспирин, акрихин; на конъюгированный БР — препараты,вызывающие холестаз, никотиновая кислота, пенициллин, эритромицин и др.

Определение содержания БР и его фракций в сыворотке крови колориметрическим диазометодом по Иендрашику.

Принцип метода: при взаимодействии сульфаниловой кислоты с азотистокислым натрием образуется диазофенилсульфоновая кислота, которая, реагируя со связанным БР сыворотки, дает розово-фиолетовое окрашивание. По интенсивности его судят о концентрации билирубина, вступающего в прямую реакцию. При добавлении к сыворотке крови кофеинового реактива свободный БР переходит в растворимое диссоциированное состояние и также вызывает розово-фиолетовое окрашивание раствора со смесью диазореактивов. По интенсивности последнего фотометрически определяют концентрацию общего БР. По разнице между содержанием общего и связанного БР определяют количество свободного.

Ход определения. В три пробирки вводим реактивы согласно схеме (таблица 2).

Таблица 2 — Данные для определения уровня БР в сыворотке крови

Реактив, мл

Общий билирубин

Связанный билирубин

Контрольная проба

Сыворотка

0,25

0,25

0,25

Кофеиновый реактив

1,75

1,75

Физиологический раствор

1,75

0,25

Диазосмесь

0,25

0,25

Колориметрируем пробы при зеленом светофильтре (500-560 нм). Оценку результатов производим по калибровочному графику. Находим содержание общего и связанного БР в мкмоль/л. Свободный БР определяем расчетным путем — общий минус прямой.

2.1.2 Прямые спектрофотометрические методы (л = 450нм) применяют как экспресс-методы для диагностики гипербилирубинемий новорожденных

2.1.3 Микрометод определения билирубина в капиллярной крови новорожденных

Принцип метода: соответствует методике исследования по Иендрашику.

Ход определения. В центрифужную пробирку вносят 0,6 мл изотонического раствора NaCl и 0,1 мл капиллярной крови. Одновременно набирают микрокапилляр крови для определения гематокрита. К 0,5 мл центрифугата добавляют 1,75 мл кофеинового реактива, смесь перемешивают, измеряют абсорбцию контрольной пробы (Ак) при длине волны 540 нм. Затем содержимое из кюветы выливают в пробирку, добавляют к нему 0,25 мл диазосмеси и через 15 минут вновь измеряют оптическую плотность. Из полученного значения абсорбции вычитают А опытной пробы, после чего по калибровочной кривой рассчитывают концентрацию билирубина в пробе. Окончательный расчет выполняют с учетом разведения крови и гематокрита по формуле:

Концентрация БР Концентрация общего БР * (7 — Ht) в крови, мкмоль/л 1 — Ht (1)

где 7-Ht — истинное разведение плазмы крови; 1 — Ht — объем плазмы.

Содержание БР, определенное микрометодом в капиллярной крови здоровых новорожденных, составляет: в 1-ые сутки жизни — 11,77-66,80 мкмоль/л; во 2-е — 11,65-91,30, в 3-и — 29,42-163,30, в 4-е — 17,10-196,0, в 5-е — 29,42-186,5, в 6-е — 32,16-127,0 мкмоль/л.

Определение почасового прироста БР

Опасность гибели доношенного ребенка от ядерной желтухи возникает при концентрации БР в крови 300- 340 мкмоль/л, а у недоношенного — 170-200 мкмоль/л. Для предотвращения этого грозного осложнения целесообразно оценивать почасовую динамику изменений содержания БР.

Ожидаемый почасовой прирост БР:

Bt = Bn — 34 мкмоль/л (2)

где Bn- содержание БР в момент исследования, n-часы жизни ребенка, 34 — средний уровень БР в пуповинной крови, Bt- прирост концентрации БР в час.

Истинный прирост содержания БР:

Bt = Bn2 -Bn1 (3)

n2-n1,

где Bn1- уровень БР при первом определении,

Bn2 — уровень БР при втором определении,

n1- возраст в часах при первом определении, n2 — возраст в часах при втором определении [4].



Источник: studbooks.net


Добавить комментарий