Биохимия обмена билирубина

Биохимия обмена билирубина

Цели практической работы:

  • закрепить знания о видах, функциях и превращениях гемоглобина;

  • изучить основные виды, причины и лабораторную диагностику желтух;

  • научиться исследовать содержание билирубина и его фракций в сыворотке крови.

Задания для самостоятельной работы:

1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.

2. Оборудуйте рабочее место для практической работы.

3. Выполните практическую работу.

4. Сделайте необходимые расчеты.

  1. Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.

  2. Сделайте вывод по работе и рисунки.

  3. Ответьте на дополнительные вопросы.

Принцип:

Связанный (прямой) билирубин непосредственно реагирует с диазотированной сульфаниловой кислотой, а свободный (непрямой) – в присутствии кофеинового реактива с образованием окрашенного азобилирубина, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию билирубина.

Реактивы:

  1. Кофеиновая смесь.

  2. Калибровочный раствор билирубина.

  3. Диазореактив (сульфаниловая кислота+нитрит натрия).

  4. Дистиллированная вода.

  5. Физиологический раствор.

  6. Сыворотка крови.

Оборудование:

  1. ФЭК с кюветой на 5 мм.

  2. Штатив с пробирками.

  3. Фильтровальная бумага.

  4. Стеклограф.

Ход работы:

1. Определение коэффициента пересчета.

К = Ск / Ек

Где:

К – коэффициент пересчета.

Ск – концентрация билирубина в калибровочном растворе.

Ек – оптическая плотность калибровочного раствора.

2.Определение количества билирубина.

Реактивы.

Общий билирубин, мл.

Связанный билирубин, мл.

Раствор сравнения, мл.

Сыворотка крови.

0,25

0,25

0,25

Кофеиновый реактив.

2,00

2,00

Физиологический раствор.

2,00

Диазореактив.

0,25

0,25

0,25

  • Смеси аккуратно перемешать.

  • Оставить стоять связанный билирубин на 10 минут, общий билирубин на 20 минут.

  • Измерить оптическую плотность общего (Еобщ) и связанного (Есвяз) билирубина против раствора сравнения при длине волны 540 нм в кювете на 5 мм.

Расчет результатов проводим по формулам:

Собщ = К * Еобщ (мкмоль/л).

Ссвяз = К * Есвяз (мкмоль/л).

Ссвоб = Собщ – Ссвяз (мкмоль/л).

Норма билирубина в плазме крови:

  • общий — 3,4-20,5 мкмоль/л.

  • непрямой 1,7-17,1 мкмоль/ л.

  • прямой 0,86-5,3 мкмоль/л.

Клинико-диагностическое значение определения уровня билирубина в крови.

Одним из важнейших пигментов и продуктов распада гемоглобина является билирубин. Уровень общего, прямого и связанного билирубина показывает работу печени и почек, а также уровень распада эритроцитов в крови. Определение общего билирубина и его производных в крови, моче и кале производят для дифференциальной диагностики различных видов желтух.

Общий билирубин состоит из 2 фракций:

Непрямой (свободный, комплекс с альбуминами).

Прямой (конъюгированный, связанный с глюкуроновой кислотой).

Увеличение содержания билирубина сопровождается желтушной окраской слизистых оболочек и кожных покровов. Легкая форма желтухи до 86 мкмоль/л, среднетяжелая 87-159 мкмоль/л, тяжелая 160 мкмоль/л.

Содержание непрямого (свободного) и общего билирубина в крови возрастает при:

  • повышенном распаде эритроцитов (гемолитическая анемия);

  • физиологической желтухе новорожденных;

  • врожденных и приобретенных нарушениях превращения свободного билирубина в связанный в печени (синдром Жильберта).

Концентрация прямого (связанного) билирубина в крови увеличивается при воспалительных процессах в печени (гепатит).

Содержание прямого и общего билирубина в крови увеличивается при механической желтухе.

Содержание общего билирубина увеличивается также при приеме лекарств, увеличивающих гемолиз (н-р аспирин, тетрациклин).

Уровень прямого билирубина может увеличиваться под действием лекарств, задерживающих желчь в печени (холестаз) н-р пиницилин, эритромицин, пероральных контрацептивов, никотиновой кислоты.

Ответьте на вопросы:

  1. Нарисуйте схему распада и синтеза гемоглобина.

  2. Расскажите о причинах и лабораторной диагностике гемолитической желтухи.

  3. Расскажите о причинах и лабораторной диагностике паренхиматозной желтухи.

  4. Расскажите о причинах и лабораторной диагностике механической желтухи.

  5. Какие заболевания могут сопровождаться желтухами? Почему?



Источник: studfile.net


Добавить комментарий