Определение алт кинетическим методом

Определение алт кинетическим методом

УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»

Приказом Росздравнадзора

от _________ 2011г. № ______

Руководитель организации-заявителя

________________Е.М.Рахманько

«___»______________ 2011 г.

М.П.

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ

набора реагентов для определения активности

аланинаминотрасферазы (АЛТ) кинетическим методом

АЛТ-100, АЛТ-200, АЛТ-500

(жидкий реагент)

НАЗНАЧЕНИЕ

Область применения – клиническая медицина, клиническая лабораторная диагностика. Определение активности АЛТ в сыворотке, гепаринизированной плазме крови или других биологических жидкостях.

ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Принцип метода

Кинетический метод определения каталитической активности АЛТ основан на последовательности ферментативных реакций:

АЛТ

L-аланин + 2-оксоглутарат ←—→ глутамат + пируват

ЛДГ

пируват + НАДН + Н+←—→ лактат + НАД+

Скорость уменьшения концентрации НАДН, который имеет максимум поглощения при 340 нм, пропорциональна активности АЛТ и измеряется фотометрическим методом.

Состав набора АЛТ-100 АЛТ-200 АЛТ-500

Реагент 1 1 х 80 мл 2 х 80 мл 2 х 200 мл

Реагент 2 1 х 20 мл 2 х 20 мл 2 х 50 мл

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Количество реагентов, добавляемое в кювету можно пропорционально увеличивать или уменьшать.

Линейная область определения до 240 Е/л. Пробы, содержащие АЛТ с активностью выше 240 Е/л, разводят 0,9 % NaCl в соотношении 1: 1, а полученный результат умножают на 2.

Реагенты пригодны к использованию, если оптическая плотность рабочего реагента больше 1,000 (измерять при комнатной температуре относительно дистиллированной воды при длине волны 340 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см).

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

• Использовать только для диагностики in vitro.

•Реагенты содержат азид натрия в качестве консерванта: избегать попадания на кожу и слизистые!

ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

• Для определения активности АЛТ в биологических жидкостях, содержащих аланинаминотрансферазу можно использовать измерительные фотометрические приборы, располагающие отделением для термостатирования кюветы, другие полуавтоматические и полностью автоматизированные биохимические анализаторы.

Набор адаптирован к работе на автоматических анализаторах типа Hitachi 911, 912.Программа адаптации доступна по требованию.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Сыворотка, гепаринизированная плазма крови. Избегать гемолиза!

Образцы можно хранить 4 часа при температуре 15-25 оС или 1-2 дня при температуре 2-8 оС.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА И РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Приготовление рабочего реагента

Для приготовления рабочего реагента смешивают Реагент 1 и Реагент 2 в соотношении 4 +1.

Не допускать вспенивания!

Рабочий раствор стабилен 7 дней при температуре 2-8 оС или 48 часа при 15-25 оС.

Рабочий реагент содержит: трис-буфер (рН 7,5), 2-оксоглуторат натрия, НАДН, ЛДГ, L-аланин

Методика анализа

Набор реагентов предназначен для ручного определения и для определения с помощью автоматических, полуавтоматических анализаторов.

Ручное определение

Длина волны 340 нм, температура измерений 37°С, кювета 1 см.

Метод Sample Start

В термостатируемую кювету помещают 1000 мкл рабочего реагента, прогревают содержимое до температуры определения 5 мин. Затем добавляют 100 мкл исследуемого материала и тщательно перемешивают.

Инкубируют 1 минуту при температуре 37°С (время инкубации отсчитывается от момента прибавления пробы), измеряют оптическую плотность раствора по отношению к воздуху или воде. Точно через 2 мин повторяют измерения. Вычисляют среднее изменение оптической плотности за 1 минуту (А/мин).

Метод Reagent Start

В термостатируемую кювету помещают 800 мкл Реагента 1, добавляют 100 мкл исследуемого материала и тщательно перемешивают, прогревают содержимое до температуры определения. Затем прибавляют прогретый заранее до температуры определения 200 мкл Реагент 2 и тщательно перемешивают.

Инкубируют 1 минуту при температуре 37°С (время инкубации отсчитывается от момента прибавления Реагента 2).

Далее проводят измерения, как и в пункте Sample Start.

РАСЧЁТ

Каталитическую активность АЛТ (в Е/л) в исследуемой пробе определяют по формуле:

Е/л = А/мин х F

Величина F при 340 нм, длине оптического пути 1 см и 37°С:

F1746

Нормальные значения

Активность АЛТ в Ед/л при температуре измерений 37°С в сыворотке и плазме крови:

— мужчины до 42 Е/л

— женщины до 32 Е/л

Рекомендуется для каждой лаборатории разработка собственных норм, характерных для локальной популяции

Пересчет единиц

1 Е/л = 1 мкмоль/(мин х л)

1 кат/л = 1 моль/(сек х л)

1 мккат/л = 60 Е/л

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Хранение компонентов набора должно производиться при температуре от 2 до 8 °С. Срок годности наборов – 1 год с даты изготовления.

Рабочий раствор стабилен 7 дней при температуре 2-8 оС или 48 часа при 15-25 оС.

Начальник производства __________________Т.М.Якименко

(подпись)

____________________________________________________________________________/________________Должность руководителя ЛПУ, (подпись, печать) (ФИО)

проводившего медицинские

испытания



Источник: lib.znate.ru


Добавить комментарий