Принцип метода билирубина в крови

Принцип метода билирубина в крови

БИЛИРУБИН-ВИТАЛ-12

ЦЕНА

НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО И ПРЯМОГО БИЛИРУБИНА

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ УНИФИЦИРОВАННЫМ МЕТОДОМ ЕНДРАССИКА-ГРОФА

Кат. № В 03.12 — 138 определений прямого и

138 определений общего билирубина

ПРИНЦИП МЕТОДА

Общий билирубин определяется на основе реакции с диазотированной сульфаниловой кислотой, после диссоциации неконъюгированного (непрямого, свободного) билирубина при участии кофеинового реагента. Для определения содержания конъюгированного (прямого, связанного) билирубина из реакционной смеси исключается кофеиновый реагент. Концентрация неконъюгированного билирубина рассчитывается по разнице концентрации между общим и конъюгированным билирубином.

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ)

Свежая сыворотка крови без следов гемолиза

СОСТАВ НАБОРА

РЕАГЕНТ № 1 – КОФЕИНОВЫЙ РЕАГЕНТ

Кофеин…………………………………………..……….52 ммоль/л

Натрия бензоат…………………..…………….104 ммоль/л

Натрия ацетат.…………………..…………….184 ммоль/л

РЕАГЕНТ № 2 – СУЛЬФАНИЛОВАЯ КИСЛОТА

Сульфаниловая кислота………………………29 ммоль/л

HCl………………………………………….…170 ммоль/л

РЕАГЕНТ № 3 – НАТРИЯ НИТРИТ

Натрия нитрит………………….………………72 ммоль/л

РЕАГЕНТ № 4 — ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ РАСТВОР

Натрия хлорид………………………..………154 ммоль/л

РЕАГЕНТ № 5 – КАЛИБРАТОР

Билирубин…………………………………..171 мкмоль/л

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Линейность — отклонение не более 8 %

в диапазоне концентраций 8-410 мкмоль/л

Чувствительность — не более 5 мкмоль/л

Коэффициент вариации – не более 8 %

Время проведения анализа:

20 мин – общий билирубин,

5 мин – прямой билирубин.

ХРАНЕНИЕ

1. Срок годности набора – 12 мес

( хранение при 18-25°С в темноте).

ВНИМАНИЕ! Тщательно закрывайте флаконы непосредственно после каждого использования реагентов.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ДИАЗОРЕАГЕНТА

Смешать необходимые количества реагента № 2 и реагента № 3 в соотношении 100+2,5.

Диазореагент стабилен 48 часов при температуре хранения 18-25°С, 10 дней при 2-4°С. Хранить в плотно закрытой посуде в темноте.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ КАЛИБРАТОРА

Внести 1 мл бидистиллированной воды во флакон № 5.

Концентрация билирубина в растворе – 171 мкмоль/л (100 мг/л).

Разведенный калибратор стабилен 5 дней в темноте при температуре хранения 2-4°С или 20 дней при -18°С.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Длина волны: 535 нм (500-560 нм).

Длина оптического пути: 1 см.

Температура инкубации: 18-25°С.

Внести в пробирки:

 

Реагенты

Опытная проба

Холостая

проба

Общий билирубин

Связанный

билирубин

Образец

0,2 мл

0,20 мл

0,20 мл

Реагент № 1

1,4 мл

Реагент № 4

0,20 мл

1,60 мл

1,80 мл

Диазореагент

0,20 мл

0,20 мл

 

Пробы перемешать.

Для определения содержания общего билирубина инкубировать 20 мин, для определения связанного (прямого) билирубина инкубировать точно 5 мин при 18-25°С.

Фотометрировать против холостой пробы.

Концентрацию билирубина в сыворотке крови рассчитать по калибровочному графику.

ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОГО ГРАФИКА

 

1

2

3

4

5

Проба 1

0,01

0,39

1,40

0,20

8.55

Проба 2

0,02

0,38

1,40

0,20

17.1

Проба 3

0,04

0,36

1,40

0,20

34.2

Проба 4

0,06

0,34

1,40

0,20

51.3

Проба 5

0,08

0,32

1,40

0,20

68.4

Проба 6

0,10

0,30

1,40

0,20

85.5

 

1. Реагент № 5 (калибратор), мл

2. Реагент № 4 (физ. раствор), мл

3. Реагент № 1 (кофеиновый реагент), мл

4. Диазореагент, мл

5. Концентрация билирубина (С) в калибровочной пробе, мкмоль/л

Внести в пробирки компоненты 1-4, перемешать и инкуби-ровать 20 мин при 18-25°С.

Фотометрировать против бидистиллированой воды.

РАСЧЕТЫ

1. По калибровочному графику рассчитать коэффициент k=C/А, где: А – адсорбция калибровочной пробы;

С – концентрация билирубина в этой пробе.

2. Концентрация билирубина в опытной пробе рассчи-тывается в мкмоль/л по формуле: (Аоп – Ахол ) ´ k,

где: k – коэффициент, рассчитанный по калибровочному графику,

Аоп — адсорбция опытной пробы,

Ахол — адсорбция холостой пробы.

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ

Общий билирубин: 8,5-20,5 мкмоль/л.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. При концентрации билирубина, превышающей 400 мкмоль/л, сыворотку крови следует развести. При расчете концентрации учесть степень разведения.

2. Размораживание калибратора допускается один раз.

3. Реагент № 5 светочувствителен!!! И сухой и разведенный калибратор хранить в темноте!

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Правильность проверена при помощи контрольных сывороток “Accutrol normal chemistry control” & “Accutrol abnormal chemistry control (Sigma chemical company, USA).

 



Источник: labdiagnostics.ru


Добавить комментарий